pcr中引物的作用

pcr中引物的作用：找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。在PCR（聚合酶链式反应）技术中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物，利用PCR扩增技术，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环，延伸后得到的产物同样可以和引物结合。

1、扩展资料PCR引物设计PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。

2、设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。

3、引物设计的基本原则：引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

4、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。

5、ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。

6、引物内部不应出现互补序列。

7、两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。

8、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。

9、引物3‘端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，最佳选择是G和C。

10、引物的5′端可以修饰。

11、如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。