pcr反应体系包括哪几个组分

pcr反应体系包括哪几个组分的答案是：寡核苷酸(引物)；4种dNTP；TaqDNA聚合酶；靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系

(1)引物长度- 一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有

效扩增。

(2) 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。

(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布，G/C 含量在45%~ 55% 之间，引物碱基序列尽可能选

择碱基随机分布，避免嘌呤、嘧啶的连续排列。

(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互补，使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。

(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对，并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。

(6) 引物5' 端碱基可不与模板匹配，可添加与模板无关的序列(如限制性内切酶的识别

位点、ATG 起始密码子或启动子序列等)。这些与原初模板并不配对的非互补序列在后续的循

不中将被带到双链DNA 中去，这样反应产物不仅含有目的序列，同时在目的基因两侧又有了

的限制酶切位点，用相应的限制酶切割后即可将PCR 产物定向克隆到载体中。

类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性，模板DNA经加热至94℃左右一定时

间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引物的退火(复性)，模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；引物的延伸，DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。